Precipitation of lysozime and bovine and porcine's insulines by "salting out" with volatiles electrolytes

A precipitação de proteínas através da adição de sais (por exemplo, o sulfato de amônio e cloreto de sódio) é uma técnica comumente utilizada em recuperação e purificação de proteínas. Contudo, a remoção de sais do precipitado e tratamento da solução remanescente contendo altas concentrações de sal são etapas limitantes, devido ao custo do processo e a regulamentação ambiental. O uso de eletrólitos voláteis é uma alternativa aos sais convencionais neste tipo de processo, visto permitirem um fácil processamento e redução do custo do tratamento de efluentes: os sais voláteis podem ser removidos com a redução de pressão ou elevação da temperatura. Neste trabalho foram determinadas as curvas de solubilidade para a lisozima e insulinas bovina e suína em soluções aquosas de sais voláteis, em sistema vedado contendo carbonato, carbamato e bicarbonato de amônio em equilíbrio com CO2 e NH3. Estas curvas de equilíbrio foram determinadas como função da concentração salina (1,00 a 7,00 mol.kg-1), da temperatura (5,0 a 25,0 °C), e razão nitrogênio por carbono (RN/C) (2,0 e 2,5) das soluções.O aumento do conteúdo de nitrogênio aumentou a solubilidade das proteínas que, de uma forma geral, apresentaram um comportamento de solubilidade retrógrada em relação à temperatura. Espectros de dicroísmo circular sugeriram uma pequena desnaturação causada pela precipitaçãoProtein precipitation induced by salt addition (e.g., ammonium sulfate and sodium chloride) is a commoly used technique in the downstream processing of proteins. However, salt removal from the precipitate and disposal of the salt containing liquid phase are key steps of the process due to cost and environmental concerns. Volatile salts are alternatives to conventional salts in this process since they can allow easy processing and reduce the cost of waste disposal: the volatile salt can be removed by pressure reduction and temperature increase. In this work we reported the solubility curves for lysozyme and swine and bovine insulins in aqueous solutions of the volatile salts of the system comprised of ammonium carbonate, carbamate, and bicarbonate in equilibrium with CO2 and NH3. These equilibrium curves were determined as funciton of the salt concentration (1.0-7.0 mol/kg), temperature (5.0-25.0 ºC), and N/C ratio (2.0 and 2.5) of the solutions. The increase of the N content of the solutions increased the proteins solubility that in general had a retrograde solubility. Circular dichroism spectra suggested some denaturation caused by the procipitatio